蛋白質體學實驗之樣品前處理與蛋白質定量

在蛋白質定量的部份在此僅介紹最廣為使用的Bradford法，Bradford法是近年來廣被使用的商品化方式。

其利用蛋白質與染劑相鍵結的測定法，原理是運用染劑可依蛋白質濃度不同，使其產生的顏色色差有程度上的變化。

1.從生物樣本中萃取蛋白質

★實驗操作所需之手套，可參考使用本站: 橡膠檢診手套或NBR手套

2.從細胞中分離蛋白質

★ 可參考使用本站: 1.5ml微量離心管

3.組織或細胞清洗

先以pH7.4 Tris-HCI清洗生物樣品(組織或細胞),去除干擾物質其步驟如下：

●將生物樣品浸泡於Tris-HCI

★ 配置溶液所需之pH meter可參考使用本站:SP-2100 pH meter 酸鹼度計

●以震盪器震盪約一分鐘

★ 可參考使用本站: 多用途試管振盪器Vortex GenieⅡ

●離心(4℃ 2000G 10分鐘)後上層液體

★ 離心設備可參考使用本站:Z216MK微量高速冷凍離心機

●再重複上述三步驟一次

以100ml mimiQ 加0.788g Tris-HCI製備, 50mM Tris-HCI buffer,pH 7.4

4破細胞與Protein deNature前準備

將樣品溶解於IEF溶液中:

(7M Urea,21g) 4％ (CHAPS, 2g)  (2M Thiourea, 7.6g) >>加 ddH2O總體積到50ml

Urea不能加熱且不好溶解，所以要攪伴一夜，須事先準備。

★ 可參考使用本站: PC-420D CORNING數字式電磁加熱攪拌器

5.超音波震碎

可參考使用本站: 130瓦外控脈衝式超音波細胞破碎機

6.離心10000G、90分鐘、溫度20℃

★ 可參考使用本站: Z216MK微量高速冷凍離心機

7.蛋白質定量Bradford分析

★ 可參考使用本站: Bradford蛋白質定量檢測試劑

★ 可參考使用本站: 塑膠比色槽或 微量石英比色槽

參考來源: Ribowsone蛋白質體學實驗教材

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