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蛋白質體學實驗之第二維電泳-分子量分離
最新消息 - 2013/4/30
從IEF中取出strip，以二次去離子水沖掉礦物油並將 IPG轉放至新容器
★沖洗礦物油所需之洗瓶，可參考使用本站: 廣口彩色洗瓶 Wash Bottles, PE 或 彩色洗瓶 Safety Wash Bottle, PE
配置Equilibrium buffer
|
Equilibrium buffer最終體積加水至100ml |
||
|
1.5M Tris pH=8.8 |
50mM |
3.3ml |
|
Urea |
6M |
36g |
|
Glycerol |
30％ |
30g |
|
SDS |
2％ |
2g |
★ sampleloading所需之pipet，可參考使用本站: Pipet 微量分注器
★ 配置溶液所需之pH meter可參考使用本站:SP-2100 pH meter 酸鹼度計
再斷一次雙硫鍵
將IPG strip浸泡於含有還原劑(DTE)之平衡溶液 (Equilibrium buffe)中再行還原並與SDS反應，以DTE 10mg/Equilibrium buffe 1ml 的比例於室溫下反應15min
★ 等待時間所需之計時器可參考使用本站: 電子計時器 單功能 Timer
15分鐘後抽掉液體
★ 抽掉液體所需之抽取器可參考使用本站: BioVac 225 Biosuction 生化廢液抽取系統 或 BioVac 240 Biosuction 生化廢液抽取系統
IAA修飾CYSTINE避免雙硫鍵再生
以IAA 25mg/Equilibrium buffe 1ml的比例於室溫下反應15min
移轉至SDS PAGE-IPG strip轉移至SDS PAGE上並注入0.5％的agarose黏合
★ 跑SDS PAGE所需之電泳槽，可依所需尺寸參考使用本站: 電泳儀器
★ 跑SDS PAGE所需之電源供應器，可參考使用本站: 電源供應器
備好Buffer設定好電源條件>>第二維電泳開始
電泳完成後經過染色>>影像拍照或掃描後即可進行定量分析
★ 影像拍照所需之掃描或照膠系統，可參考使用本站: 膠片影像分析
★ 定量分析所需之軟體，可參考使用本站: 二維電泳影像分析軟體(經濟版) Prodigy samespots 2D 或 二維電泳影像分析軟體 Progenesis samespots 2D
參考來源: Ribowsone蛋白質體學實驗教材
如需 二維膠體蛋白質體學實驗服務 ，歡迎來電或email: sales@cae.url.tw洽詢
