蛋白質體學實驗之膠體染色與影像分析

主要染色法比色

A.   SYPRO Ruby染色法

●固定：以7％醋酸和10％甲醇浸泡凝膠

●三十分鐘後倒掉

●加入二次去離子水清洗一次

●加入SYPRO Ruby染色至16小時

●退染：再以7％醋酸和10％甲醇授泡凝膠

●三十分鐘後倒掉

●再加入二次去離子水清洗一次

由於SYPRO Ruby會與玻璃反應，為了避免SYPRO Ruby與儀器上的玻璃反應所以一定要將凝膠表面之SYPRO Ruby洗去。

★實驗操作所需之手套，可參考使用本站: 橡膠檢診手套或NBR手套

★實驗操作所需之血清試藥瓶，可參考使用本站: BOECO廣口血清試藥瓶

B. Coomassie Stain膠片染色法：

●取染色盤，倒入 CBR 染色液，放入膠片到染色缸中。

●在 CBR 中染色約 30 min，染色盤要加密蓋，置於旋轉平台慢速 50 rpm 搖盪

●染色後小心把 CBR 染劑倒回原來瓶中，整塊膠片變成藍色，先用自來水洗掉殘餘的染色液，再倒入約 20 mL 脫色液，加密蓋後再放回旋轉平台搖盪

●待脫色液轉成藍色後，可以換新脫色液；如此脫色數次，在一小時內應可看到蛋白質的藍色色帶出現。

●用過的脫色液，請回收倒在有機溶液的廢液桶中。

●待膠片背景完全透明後，染色脫色完成。倒去脫色液，改用 50% 甲醇液洗一兩次

★實驗操作所需之手套，可參考使用本站: 橡膠檢診手套或NBR手套

★實驗操作所需之血清試藥瓶，可參考使用本站: 廣口血清試藥瓶

★實驗操作所需之旋轉平台，可參考使用本站: OSR205 蹺蹺板式震盪器 或 RS-101 Rocking shaker搖擺振盪器/蹺蹺板震盪器

取出凝膠，上影像系統掃描或照膠系統拍照

★照膠所需之照像系統，可參考使用本站: UVCI 140/200萬畫素CCD凝膠照像系統

二維蛋白質影像樣點相對定量分析

★蛋白質定量所需之分析軟體，可參考使用本站: 二維電泳影像分析軟體(經濟版) Prodigy samespots 2D 或 二維電泳影像分析軟體 Progenesis samespots 2D

挖取影像比對後有變異的點

質譜前處理~膠內水解

參考來源:

Ribowsone蛋白質體學實驗教材、國立台灣大學生物技術研究中心/生物技術核心實驗

如需 二維膠體蛋白質體學實驗服務 ，歡迎來電或email: sales@cae.url.tw洽詢